recherche et identification des bactéries halophiles dans le fromage

Recherche et identification des bactéries halophiles dans le fromage

A- Mode opératoire :

1- échantillonnage :
- prélèvement d’un échantillon de fromage et le conserver dans un réfrigérateur (0-5c°) avant d’effectuer l’analyse.
- Analyser les unités d’échantillonnage le plus tôt possible après leur arrivée au laboratoire.
2- Préparation de l’échantillon :

- Préparer une dilution du fromage en ajoutant de façon a sceptiques 10g de fromage a 90ml de solution de citrate de sodium a 2٪ tempérée (40-45c°).
-passer la dilution a l’agitateur pour obtenir une suspension homogène (ne pas mélanger plus de 2,5minute)
- vérifier le pH de la suspension. Si le pH ne se situe pas entre 5,5 et 7,6 ajuster le pH a 7 avec du NAOH ou de HCL.
- préparer les dilution dicimales successives dans l’eau peptonée .
3- ensemencement :

- Effectuer l’ensemencement dans les 15minutes qui suivent la préparation des dilutions.
- Inoculer 1ml de chaque dilution dans une boite de pétrie contenant le milieu de Chapman.
- maintenir les boites a l’endroit jusqu'à ce que le milieu absorbe l’inoculum (10min environ).
4- Incubation :

- inverser les boites et incuber a 37c° pendant 24-48 h.
B- Le milieu Chapman :

La gélose Chapman est le milieu sélectif des bactéries halophiles (les Staphylococcus , les Micrococcaceae, les Enterococcus, Bacillus et des rares bactéries de G-).
1- La composition :

Peptone 10g
Extrait de viande de bœuf 1g
Chlorure de sodium 75g
Mannitol 10g
Rouge de phénol 0,025g
Agar-agar 15g
E.D 1l
PH=7,4
2- Caractéristique :

- Une base nutritive ordinaire.
- une teneur élevée en NACL qui permet la sélection des bactéries halophiles, et inhibe la majorité des autres bactéries.
-La fermentation du mannitol révélée grâce au virage de l’indicateur de PH : le rouge de phénol.
3- la lecture :

- colonies jaunes : Mannitol (fermentation du mannitol+ par les bactéries).
- colonies rouges : mannitol- (les bactéries ne fermentent pas le mannitol mais elles utilisent le peptone dans leur métabolisme avec une légère alcalinisation du milieu.
Remarque :

Le milieu Chapman permet la sélection des staph et une orientation pour l’identification de l’espèce S.aureus, mais il ne s’agit que d’un test de préemption et une confirmation par des tests plus spécifique (coagulase, ADN ase) test obligatoire.

Les bactéries halophiles sont des organismes qui ont un besoin absolu de fortes concentrations en sel pour vivre "extrémophiles ".

Merci pour ces informations nana..